空白對照的定義及其在ELISA測定中的應用

空白對照是指在實(shí)驗設計中設置的一種陰性對照，旨在監測非特異性背景信號，并為基線(xiàn)吸光度值提供參考。在酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）中，通過(guò)引入空白對照，可以有效識別并扣除樣品讀數中的背景噪聲，從而提高檢測結果的準確性。然而，在多分析物ELISA測定中，由于其固有的高背景信號特性，這種標準化方法可能并不適用。本文將詳細探討為何在Cygnus的ELISA測定中通常不建議使用空白對照。

減去背景值對多分析物ELISA檢測結果的影響

在多分析物ELISA測定中，如HCP ELISA，由于HCP抗體的復雜性，其背景信號通常較高。這使得此類(lèi)檢測的基線(xiàn)吸光度值（OD值）普遍高于簡(jiǎn)單的單分析物檢測。從統計學(xué)角度來(lái)看，從樣品讀數中減去較高的基線(xiàn)OD值可能會(huì )增加數據的變異程度，從而影響結果的準確性和可靠性。

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以下示例說(shuō)明了背景值扣除對變異系數的影響。在表1中，標準A的平均OD值為0.100，標準B的平均OD值為0.150 。當通過(guò)原始讀數減去空白對照的OD值來(lái)計算變異系數（CV）時(shí)，CV值顯著(zhù)上升，導致標準B的CV%從6.7%增加至20%。

表1. 背景值扣除對變異系數的影響

檢測背景值越高，對變異系數百分比的影響就越大。

表2展示了8種不同ELISA試劑盒在10組隨機數據集中的平均變異系數（CV%）?；谠糘D值計算得出的CV%范圍為10%至20%，而經(jīng)過(guò)空白對照校正后的相同數據CV%則超過(guò)了20%。在所有情況下，經(jīng)過(guò)空白對照校正后的CV%均高于未校正的數據。在實(shí)際應用中，分析數據放行的標準通常要求重復檢測的CV%不超過(guò)20%，上述差異可能直接導致分析結果無(wú)法滿(mǎn)足精密度要求，從長(cháng)遠來(lái)看，引入空白對照將直接導致測試結果無(wú)法符合放行要求。

表2. 經(jīng)過(guò)空白對照校正后的CV%與未校正數據的CV%值對比

從統計學(xué)角度來(lái)看，空白對照的OD值越高，出現此類(lèi)問(wèn)題的可能性就越大。

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鑒于上述原因，Cygnus Technologies 致力于開(kāi)發(fā)和提供無(wú)需背景校正的 ELISA 試劑盒。在我們已上市的 ELISA 試劑盒開(kāi)發(fā)、分析及測試過(guò)程中，從未在批次放行的工作流程中引入空白對照校正步驟。相反，我們使用 0 ng/mL 標準品來(lái)設定 Y 軸截距并確定標準曲線(xiàn)的下限。因此，如果您在實(shí)驗流程中加入了空白對照校正步驟，其獲得的檢測變異系數（CV）百分比很可能會(huì )高于 Cygnus 質(zhì)控團隊所記錄的結果。Cygnus針對每一種檢測試劑盒均提供相應的QS（Qualification Summary）文件，如有需求歡迎點(diǎn)擊這里填寫(xiě)信息索取，或直接聯(lián)系Cygnus中國總代理西美杰。如您在使用Cygnus HCP ELISA試劑盒的過(guò)程中遇到任何問(wèn)題，我們的技術(shù)支持團隊將竭誠為您提供解決方案和建議。