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1、Mirus廣譜DNA轉染試劑TransIT®-LT1、TransIT®-2020TransIT-X2®三者的區別是什么?

2、TransIT®-LT1轉染試劑的主要成分是什么?

3、TransIT®-2020轉染試劑的主要成分是什么?

4、TransIT®-2020適用于轉染哪些細胞?

5、ransIT-X2® Dynamic Delivery System的主要成分是什么?

6、TransIT-X2® Dynamic Delivery SystemPEIPolyethyeleneimine)是類(lèi)似的東西嗎?

7、TransIT-X可用于貼壁和懸浮細胞轉染嗎?

8、TransIT-X可以轉染原代細胞嗎?

9、TransIT-X可以轉染神經(jīng)細胞嗎?

10、抗生素會(huì )影響轉染試劑的作用嗎?

11、如何優(yōu)化轉染效率?

12、轉染結果不理想時(shí)該怎么辦?

 



 


 

1、Mirus廣譜DNA轉染試劑TransIT®-LT1、TransIT®-2020TransIT-X三者的區別是什么?

TransIT®- LT1、TransIT®-2020TransIT-X2®都是高效的廣譜轉染試劑,但它們的化學(xué)性質(zhì)不同,三者特點(diǎn)見(jiàn)下表。TransIT-X2是首選用于高效基因表達及敲除的廣譜轉染試劑。TransIT-X2能高效地轉染質(zhì)粒DNAsiRNA,也可用于二者共轉。TransIT®-LT1TransIT®-2020僅適用于質(zhì)粒DNA的轉染。TransIT®-2020TransIT-X2®都是無(wú)動(dòng)物源成分配方,因此可滿(mǎn)足有條件限制的應用需求,例如藥物開(kāi)發(fā)等。對于不同的細胞類(lèi)型,不同轉染試劑表現效果也有不同,因此對于不同細胞類(lèi)型的具體應用,可以參考我們的轉染試劑推薦方案數據庫Reagent Agent。(https://www.mirusbio.com/tech-resources/transfection-database

特點(diǎn)

TransIT-X2® Dynamic Delivery System

TransIT®-2020 Transfection Reagent

TransIT®-LT1 Transfection Reagent

轉染核酸類(lèi)型

DNA, siRNA, miRNA, pre-miRNA

DNA

DNA

細胞毒性

極低

高效基因敲除

?

不適用*

不適用*

DNAsiRNA共轉

?

不適用

不適用

動(dòng)物源成分

無(wú)

無(wú)

*:目的基因敲除也可以通過(guò)轉染編碼shRNA的質(zhì)粒DNA來(lái)實(shí)現,但該方法敲除基因不如siRNA/miRNA高效。

 

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2、TransIT®-LT1轉染試劑的主要成分是什么?

TransIT®-LT1是一種非脂質(zhì)體的廣譜轉染試劑,主要配方是由脂質(zhì)及蛋白/聚胺混合物組成。它是市面上第一款脂類(lèi)/聚合物復合配方轉染試劑,同時(shí)具備高轉染效率和低細胞毒性特征。

 

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3、TransIT®-2020轉染試劑的主要成分是什么?

TransIT®-2020是一種專(zhuān)利的脂類(lèi)-聚合物混合配方轉染試劑,可與DNA形成多聚物脂復合物。TransIT®-2020配方中不含任何動(dòng)物源成分。

 

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4、TransIT®-2020適用于轉染哪些細胞?

TransIT®-2020是廣譜轉染試劑,適用于轉染多種類(lèi)型細胞。

· 細胞系,包括貼壁細胞和懸浮細胞(例如HepG2, MCF-7, Neuro-2a,K562,Jurkat等)點(diǎn)擊右側鏈接可以查看適用TransIT®-2020轉染的細胞類(lèi)型View a complete listing of cell lines transfected using TransIT®-2020 (PDF),

· 原代細胞和干細胞View a complete listing of primary and stem cells transfected using TransIT®-2020 (PDF)。

 

 

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5、TransIT-X2® Dynamic Delivery System的主要成分是什么?

TransIT-X2® Dynamic Delivery System是一種先進(jìn)的非脂質(zhì)體轉染系統,由一種全新型聚合物搭配Mirus專(zhuān)利配方,更容易與核酸形成復合物,適用于質(zhì)粒DNA與小分子核酸如siRNA、miRNA、pre-miRNA等的高效轉染。此外,TransIT-X2®還能實(shí)現質(zhì)粒DNAsiRNA共轉染。TransIT-X2®配方中不含任何動(dòng)物源成分。

 

 

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6、TransIT-X2® Dynamic Delivery SystemPEIPolyethyeleneimine)是類(lèi)似的東西嗎?

不是的。TransIT-X2®是一種全新的聚合物配方,并非基于PEI的改良產(chǎn)品。

 

 

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7、TransIT-X可用于貼壁和懸浮細胞轉染嗎?

可以。經(jīng)測試,我們已經(jīng)TransIT-X2成功轉染過(guò)多種貼壁細胞(如CHO-K1,HepG2,原代人乳腺上皮細胞等)和懸浮細胞(如Freestyle 293-F。

 

 

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8、TransIT-X可以轉染原代細胞嗎?

可以。TransIT-X適用于轉染多種原代細胞,我們已經(jīng)測試過(guò)HUVECs,原代人乳腺上皮細胞(HMEC)以及正常人皮膚成纖維細胞(NHDF)等原代細胞轉染效率都不錯。

 

 

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9、TransIT-X可以轉染神經(jīng)細胞嗎?

可以。我們測試過(guò)iCell® Neurons, SH-SY5Y, SK-N-MC and PC-12等神經(jīng)細胞轉染效率都很不錯。點(diǎn)擊右側鏈接可以查看適用TransIT-X轉染的細胞類(lèi)型以及推薦用量。View a complete listing of cell types transfected using TransIT-X2® by Mirus scientists and corresponding starting reagent-to-nucleic acid ratios. (PDF)

 

 

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10、抗生素會(huì )影響轉染試劑的作用嗎?

某些抗生素如卡那霉素是陽(yáng)離子,會(huì )抑制轉染試劑/核酸形成復合物,因此我們建議在轉染試劑復合物形成這一環(huán)節不要使用抗生素。轉染試劑復合物形成后,我們就可以加入到含有低水平抗生素的完全細胞培養基里了(例如將100×-鏈霉素雙抗稀釋到0.1-1×工作濃度的細胞培養基)。

 

 

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11、如何優(yōu)化轉染效率?

1)      轉染時(shí)的細胞密度 (%) 大多數細胞在轉染時(shí)細胞密度最好能達到40%-80%,但是不同類(lèi)型細胞有其最佳的轉染密度,在優(yōu)化轉染效率時(shí)要先確認細胞的最佳轉染密度;

2)      轉染試劑與DNA比例轉染試劑與DNA的使用比例通常是1-4ul1ugDNA,不同細胞可根據實(shí)際轉染效率進(jìn)行不同配比的優(yōu)化;

3)      DNA質(zhì)粒的質(zhì)量轉染用的DNA必須是無(wú)菌,高濃度,且去除內毒素的質(zhì)粒。Mirus有一款內毒素去除試劑盒(MiraCLEAN® Endotoxin Removal Kit,貨號MIR5900/MIR5910)可以質(zhì)粒中殘存的內毒素;

4)      轉染試劑與核酸形成復合物要在無(wú)血清的培養基中進(jìn)行血清可能會(huì )干擾轉染試劑與核酸形成復合物,因此在配置轉染試劑與核酸復合物時(shí)需要無(wú)血清、無(wú)抗生素的培養基,將復合物加入細胞的時(shí)候,細胞培養基是可以含血清的。

 

 

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12、轉染結果不理想時(shí)該怎么辦?

Mirus每款轉染試劑的說(shuō)明書(shū)最后都有TROUBLESHOOTING GUIDE,可以幫助客戶(hù)對照結果查找問(wèn)題原因,大部分轉染不理想的問(wèn)題都可以通過(guò)優(yōu)化操作步驟來(lái)解決,因此每一個(gè)使用Mirus轉染試劑的客戶(hù),都應在轉染前認真閱讀產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。

 

 

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